Fingerprinting

Material

  • frische, sterile Wattestäbchen (Q-tips) zum Abwischen der Mundschleimhaut
  • sterile Eppendorfreaktionsgefäße (1,5 ml)
  • steriles demin. Wasser
  • variable Pipetten und passende sterile Pipettenspitzen
  • Eis
  • 1xTAE Puffer
  • 5%iges Chelex (Bio-Rad: 745-7000 Chelex 20 Resin): 5 g in 100 ml sterilem demin. Wasser lösen )
  • Proteinase K (Roche Art.Nr. 161519) (10 mg in 1 ml sterilem demin. Wasser lösen)
  • Magnetrührer
  • Vortexer
  • Heizblöcke oder Wasserbäder bei 56°C und 95°C
  • Primer Mix CTT von Promega für die Multiplex-PCR
  • Primer für die Einzelloci-Analyse: (Synthese z.B. durch Biomers)
    • Amel-P1: 5'-GCCCTGGGCTCTGTAAAGAATAG-3'
    • Amel-P2: 5'-ATCAGAGCTTAAACTGGGAAGCTG-3'
    • D8S1179-P1: 5'-GTACAGCTGTCAAAAACCGTAT-3'
    • D8S1179-P2: 5'-ACGGCCTGGCAACTTATATG-3'
    • vWA-P1: 5´-GCCCTAGTGGATGATAAGAATAATCAGTAT-3'
    • vWA-P2: 5´-GGACAGATGATAAATACATAGGATGGATG-3'
  • PCR Gerät mit folgendem Temperaturprogramm
    • 60 sec bei 94°C
    • 60 sec bei 60°C
    • 60 sec bei 72°C
    • diese Zyklen werden 38 mal wiederholt. Abschließend werden die Amplifikate in 20 min bei 72°C komplettiert.
  • Ready-to-go-beads (GE Health Care, Bestell-Nr.: 27955801)
  • Template-DNA (siehe DNA-Extraktion aus der Mundschleimhaut)
  • Fertiggele Spreadex EL 600 Mini gels (Elchrom Cat. Nr. 3416)
  • Laufpuffer, Running Buffer (40x TAE, Elchrom Cat. Nr. 3031)
  • Auftragepuffer (Elchrom Cat. Nr. 3033)
  • Elektrophorese-Apparatur gefüllt mit 600 ml 1xTAE-Laufpuffer
  • Wasserwaage (zum Austarieren der Elektrophorese-Kammer)
  • 3%iges Agarosegel in TAE-Puffer (NuSieve 1:3 von Biozym (Cat. Nr. 50091), Kontrolle für die Amplifikatbildung)
  • sonstiges Material für die (Agarosegel-)Elektrophorese