NUGI
- 1:
Grundlagen. - 2: Biochemie.
- 3: Mikrobiologie.
- 4: Molekularbiologie.
- 4.1:
Anfang. - 4.2: Agarosegelelektrophorese.
- 4.3: Cracking.
- 4.4: Enzym-Induktion.
- 4.5: Fingerprinting.
- 4.6: Isolierung chromosomaler DNA.
- 4.7: Plasmidisolierung.
- 4.8: Polymerasekettenreaktion.
- 4.9: Restriktionsverdau.
- 4.10: Transformation.
- 4.10.1:
Einleitung. - 4.10.2: Material.
- 4.10.3: Methoden.
- 4.10.4: Ergebnisse.
- 4.10.5: Diskussion.
- 4.10.6: Infoquellen.
- 4.10.7: Allgemeines.
- 4.10.7.1:.
Voraussetzung - 4.10.7.2: Aufgabe.
- 4.10.7.3: Lernziele.
- 4.10.7.4: Zusatzinfo.
- 4.10.7.5: Rezepte.
- 4.10.7.6: Probleme.
- 4.10.7.7: Sicherheit.
- 4.10.7.8: Tipps.
- 4.10.7.9: Unterlagen.
- 4.10.7.10: Fragen.
- 4.10.1:
- 4.1:
- 5: Ökologie.
- 6: Allgemeines.
Transformation
Voraussetzungen
- Sie benötigen einen plasmidfreien E. coli Stamm, sowie einen E. coli Vector.
- Der Vector sollte in einer hochwertigen Qualität vorliegen ("supercoiled" Form). Sie haben dafür eine Agarosegelelektrophorese durchgeführt und das Ergebnis der
Plasmidpräparation richtig interpretiert. - Ausserdem können Sie die Kulturen auf Agarplatten ausstreichen und züchten.
- Wenn Sie keine Genehmigung für ein S1-Gentechniklabor besitzen, dürfen Sie dieses Experiment nur mit E. coli Plasmid-DNA durchführen. Der E. coli-Vector kann aber Fragmente chromosomaler E. coli-DNA enthalten.
Zeitbedarf:
Sie müssen die Zeit für eine Übernachtkultur, ca. 40-60 min für die Transformation und eine weitere Übernachtinkubation einkalkulieren. Für die Auswertung benötigen Sie weitere 10-20 min. Die Kontrolle auf Plasmidgehalte erfordert etwa 1 Stunde.
Folgeexperimente:
Homologe Transformationen und die GFP-Klonierung.
